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技術(shù)文章

恒遠干貨分享:用BCA法測定蛋白質(zhì)濃度

點擊次數(shù)：14807 發(fā)布時間：2020/9/16 9:15:19

1.目的

掌握BCA法測定蛋白質(zhì)濃度的原理。

2.原理

BCA(bicinchonininc acid)與二價銅離子的硫酸銅等其他試劑組成的試劑，混合一起即成為蘋果綠，即BCA工作試劑。在堿性條件下，BCA與蛋白質(zhì)結(jié)合時，蛋白質(zhì)將Cu2+ 還原為Cu+ ，一個Cu+ 螯合二個BCA分子，工作試劑由原來的蘋果綠形成紫色復合物，光吸收強度與蛋白質(zhì)濃度成正比。

3.計算

① 繪制標準曲線。

② 以測定管吸光度值，查找標準曲線，求出待測血清中蛋白質(zhì)濃度(g/L)。

③ 再從標準管中選擇一管與測定管光密度相接近者，求出待測血清中蛋白質(zhì)濃度(g/L)。

4.實驗器材

① 7220型分光光度計

② 恒溫水浴箱

③ 中試管7支

④ 槍式移液管

5.試劑

①試劑A：1％BCA二鈉鹽；2％無水碳酸鈉；0.16%酒石酸鈉；0.4％氫氧化鈉；0.95％碳酸氫鈉；混合調(diào)PH值至11.25。

② 試劑B：4％硫酸銅。

③ BCA工作液：試劑A 100ml ＋試劑B 2ml混合

④ 蛋白質(zhì)標準液：用結(jié)晶牛血清白蛋白根據(jù)其純度用生理鹽水配制成1.5mg/ml的蛋白質(zhì)標準液。（純度可經(jīng)凱氏定氮法測定蛋白質(zhì)含量而確定）

⑤ 待測樣品：用雙縮脲測定法的樣品稀釋而成。

6.BCA的優(yōu)缺點

① 操作簡單，快速，45分鐘內(nèi)完成測定，比經(jīng)典的Lowary法快4倍且更加方便；

② 準確靈敏，試劑穩(wěn)定性好，BCA試劑的蛋白質(zhì)測定范圍是20-200μg/ml，微量BCA測定范圍在0.5-10μg/ml。

③ 經(jīng)濟實用，除試管外，測定可在微板孔中就進行，大大節(jié)約樣品和試劑用量；

④ 抗試劑干擾能力比較強，如去垢劑，尿素等均無影響

此法測定蛋白質(zhì)濃度，近些年被科研工作者廣泛選用�？傊�，雖然蛋白質(zhì)含量的測定方法很多，但是，還沒有一個完美的方法。在選擇測定方法時，可根據(jù)實驗要求和實驗室條件決定。