干擾素elisa試劑盒的注意事項(xiàng)：

　　1、試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

　　2、濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

　　3、各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間醉好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

　　4、請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，醉好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)醉后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

　　5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6、底物請(qǐng)避光保存。

　　7、嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

　　8、所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

　　9、本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

　　干擾素ELISA試劑盒的操作規(guī)程：

　�。�1）待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。

　�。�2）酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。

　�。�3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。

　�。�4）陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl

　�。�5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。

　�。�6）洗板，同（4）。

　�。�7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。

　�。�8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。

　�。�9）洗板，同（4）。

　�。�10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。

　　（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。

　　（12）分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，醉終測(cè)得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

　�。�13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對(duì)照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。

原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物技術(shù)發(fā)展有限公司