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elisa試劑盒實驗前，請仔細閱讀中英文說明書，我們提供免費代測，實驗過程指導(dǎo)服務(wù)。在做ELISA實驗的時候加入顯色底物后，標準品有顏色，但結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)標準品點吸光值偏低或偏高、標準曲線無梯度等等，總結(jié)如下原因：
ELISA標準曲線點的吸光值一般在3.0以下，若太高超出儀器檢測范圍，顯示OVER FLOW，可能原因：
1.可能原因：如OD絕對值靠譜，則顯色過度
1.解決方法：TMB顯色體系中建議根據(jù)S1，S2顏色進行判斷，當S1，S2深藍色，有明顯梯度，S5有淡藍色時即可終止。
2.可能原因：僅作單波長檢測
2.解決方法： 由于參考波長讀取非特異性檢測，如指紋、劃痕、水漬等，對結(jié)果也有影響。建議*終結(jié)果以雙波長為*準確。
二、標準曲線點吸光值偏低
ELISA標準曲線點的吸光值一般要在0.8以上，若小于0.8，可能的原因：
1.可能原因：粉末標準品未充分溶解
1.解決方法：粉末標準品按說明書加一定體積的液體后，輕柔混勻，室溫靜置30分鐘，充分溶解。
2.可能原因：標準品反復(fù)凍融
2.解決方法：標準品反復(fù)凍融后活性降低。
3.可能原因：孵育溫度、時間
3.解決方法： 按說明書要求孵育條件進行孵育。
4.可能原因：顯色時間控制
4.解決方法：TMB顯色體系中建議根據(jù)S1，S2顏色進行判斷，當S1，S2深藍色，有明顯梯度，S5有淡藍色時即可終止。
三、標準曲線無梯度
ELISA 實驗中標準品2倍倍比稀釋，但結(jié)果分析標準曲線沒有梯度，可能的原因：
1.可能原因： 樣品或標準品污染
1.解決方法： 避免污染
2.可能原因：錯誤的樣品或標準品的稀釋
2.解決方法： 完全按照說明書稀釋
3.可能原因： 偶聯(lián)抗體濃度過高
3.解決方法： 按照說明書調(diào)整到*佳的濃度
4.可能原因：TMB底物孵育時間過長
4.解決方法： 調(diào)整到合適的孵育時間
5.可能原因： 錯誤的孵育時間或溫度
5.解決方法：完全按照說明書
6.可能原因：孵育時未加蓋導(dǎo)致溶液揮發(fā)和污染
6.解決方法： 貼封片或加蓋
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