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技術(shù)文章

四川師范大學(xué)汪老師與我司技術(shù)交流ELISA

點(diǎn)擊次數(shù)：14993 發(fā)布時(shí)間：2018/8/22 11:23:33

    在本月初的時(shí)候，四川師范大學(xué)汪老師在我公司訂購(gòu)了兩個(gè)指標(biāo)的進(jìn)口elisa試劑盒，昨日汪老師來(lái)電給我公司業(yè)務(wù)員，表明出：實(shí)驗(yàn)已經(jīng)完畢，但是有一些相關(guān)實(shí)驗(yàn)的小困擾。對(duì)這一問(wèn)題，我司業(yè)務(wù)員時(shí)間為汪老師安排到了技術(shù)部人員與其交流ELISA實(shí)驗(yàn)。

在這一實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，為什么必須設(shè)置復(fù)孔呢？
    其實(shí)這一問(wèn)題，之前也有客戶問(wèn)過(guò)的，為獲得更準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，強(qiáng)烈建議標(biāo)準(zhǔn)品及樣本進(jìn)行復(fù)孔檢測(cè)，因?yàn)閺?fù)孔檢測(cè)可以：
1. 計(jì)算平均值，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果更準(zhǔn)確；
2. 解決實(shí)驗(yàn)中誤操作造成的跳孔現(xiàn)象；
3. 計(jì)算CV值，對(duì)實(shí)驗(yàn)的操作和試劑盒的精密度進(jìn)行評(píng)估。

    汪老師還特別問(wèn)道：到什么時(shí)候終止進(jìn)口ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的反應(yīng)？

    我司技術(shù)人員說(shuō)明出：本實(shí)驗(yàn)*終需要酶催化底物顯色反應(yīng)來(lái)完成，在*佳時(shí)間終止反應(yīng)是ELISA實(shí)驗(yàn)成功的重要因素。在HRP-TMB酶反應(yīng)系統(tǒng)中，當(dāng)濃度標(biāo)準(zhǔn)品顏色不再變深，倒數(shù)2-3個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)品顏色開(kāi)始有淺藍(lán)色時(shí)，便需要終止反應(yīng)。上海恒遠(yuǎn)技術(shù)人員說(shuō)明出：“也可以根據(jù)濃度標(biāo)準(zhǔn)品孔在620nm的OD值來(lái)決定，OD620=0.9-0.95之間時(shí)即可終止”。

酶標(biāo)儀讀數(shù)的時(shí)候必須選用雙波長(zhǎng)是有什么原因呢？
因?yàn)椋?br />1. 在使用酶標(biāo)儀之前務(wù)必預(yù)熱10-15min，使測(cè)讀結(jié)果更穩(wěn)定；
2. ELISA實(shí)驗(yàn)采用雙波長(zhǎng)測(cè)定吸光度，可以排除單波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)的測(cè)定干擾。
一般采用波長(zhǎng)作為參照波長(zhǎng)，在參照波長(zhǎng)下，檢測(cè)物的吸光值*小，檢測(cè)波長(zhǎng)和參照波長(zhǎng)的吸光值之差可以消除非特異性吸收；因此，雙波長(zhǎng)測(cè)定，可限度的消除指紋、雜質(zhì)及不透光的物質(zhì)對(duì)酶標(biāo)儀讀數(shù)帶來(lái)的誤差，以保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確度。