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恒遠(yuǎn)ELISA試劑盒操作條件大盤點(diǎn)

點(diǎn)擊次數(shù)：14811 發(fā)布時(shí)間：2017/7/19 9:06:53

elisa試劑盒可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。該法適于測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清、血清、血漿及組織液中的樣本，攪擾小能夠測(cè)到每毫升納克水平的細(xì)胞因子（或受體）的水平。在這種測(cè)定辦法中有3種必要的試劑：①固相的抗原或抗體，②酶符號(hào)的抗原或抗體，③酶效果的底物。

ELISA試劑盒操作步驟

ELISA試劑盒運(yùn)用前，將一切試劑充沛混勻。不要使液體發(fā)生很多的泡沫，防止加樣時(shí)參加很多的氣泡，發(fā)生加樣上的差錯(cuò)。

依據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上規(guī)范品的數(shù)量決議所需的板條數(shù)。每個(gè)規(guī)范品和空白孔主張做復(fù)孔。每個(gè)樣品依據(jù)自個(gè)的數(shù)量來定，能運(yùn)用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后參加50ul于反響孔內(nèi)。

參加稀釋好后的規(guī)范品50ul于反響孔、參加待測(cè)樣品50ul于反響孔內(nèi)。當(dāng)即參加50ul的生物素符號(hào)的抗體。蓋上膜板，悄悄振動(dòng)混勻，37℃溫育1小時(shí)。

甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗刷液，振動(dòng)30秒，甩去洗刷液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。假如用洗板機(jī)洗刷，洗刷次數(shù)添加一次。

每孔參加80ul的親和鏈酶素-HRP，悄悄振動(dòng)混勻，37℃溫育30分鐘。

甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗刷液，振動(dòng)30秒，甩去洗刷液，用吸水紙拍干。ELISA試劑盒重復(fù)此操作3次。假如用洗板機(jī)洗刷，洗刷次數(shù)添加一次。

每孔參加底物A、B各50ul，悄悄振動(dòng)混勻，37℃溫育10分鐘。防止光照。

取出酶標(biāo)板，敏捷參加50ul停止液，參加停止液后應(yīng)當(dāng)即測(cè)定成果。

在450nm波利益測(cè)定各孔的OD值。

依據(jù)ELISA試劑盒試劑的來歷和標(biāo)本的性狀以及檢查的具備條件，可規(guī)劃出各種不同類型的檢查辦法。

（一）雙抗體夾心法

（二）雙位點(diǎn)一步法

（三）間接法測(cè)抗體

（四）競(jìng)爭(zhēng)法

（五）捕獲法測(cè)IgM抗體

（六）使用親和素和生物素

ELISA試劑盒遍及用作非放射性同位素的成鍵化驗(yàn). 在這種辦法中, 一般規(guī)范配體是固定的, 經(jīng)過參加溶液相受體或蛋白質(zhì)來使之成鍵. ELISA試劑盒經(jīng)過參加與受體特異性反響的抗體來定量成鍵的受體, 而且開始抗體的量以參加第二種能顯色的抗體測(cè)量. 第二種抗體能識(shí)別抗體的結(jié)尾, 在其結(jié)尾的堿性磷酸酯或過氧化物酶等與酶發(fā)生反響, 從而使溶液顯色。

原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物技術(shù)發(fā)展有限公司