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人組織蛋白酶L（CTSL）ELISA試劑盒詳細資料

點擊次數(shù)：14790 發(fā)布時間：2016/3/24 10:09:01

人組織蛋白酶L（CTSL）elisa試劑盒實驗原理：
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人組織蛋白酶 L（CTSL）水平。用純化的人組織蛋白酶 L（CTSL）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入組織蛋白酶L（CTSL），再與HRP標記的組織蛋白酶L（CTSL）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的組織蛋白酶 L（CTSL）呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人組織蛋白酶L（CTSL）濃度。
人組織蛋白酶L（CTSL）ELISA試劑盒操作步驟：
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品*終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
10 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
人組織蛋白酶L（CTSL）ELISA試劑盒注意事項：
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5 分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請*后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。

原創(chuàng)作者：上海恒遠生物技術發(fā)展有限公司