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上海恒遠(yuǎn)告訴您，最常見的ELISA試劑盒使用方法有哪兩種？

點(diǎn)擊次數(shù)：14843 發(fā)布時(shí)間：2015/11/26 9:00:06

目前在市場上*常見的兩種elisa試劑盒方法分為雙抗體夾心法及間接法這兩種，然而目前大多數(shù)客戶用的是雙抗體夾心法，有的客戶用的是間接法，這兩種方法有什么區(qū)別嗎？我們一起跟著錢經(jīng)理來看看。

elisa試劑盒雙抗體夾心法：

1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。

2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌。（同時(shí)做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。

3. 加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。

4. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

5. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

6. 結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

ELISA試劑盒間接法：

1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜；

2.次日洗滌3次；

3.加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌；

4.（同時(shí)做空白、陰性及陽性孔對照）于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml；

5.37℃孵育35-60分鐘，洗滌；

6.’*后一遍用DDW洗滌。

7. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

8. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

9. 結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物技術(shù)發(fā)展有限公司