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技術要點：ELISA試劑盒實驗過程之顯色

點擊次數(shù)：14695 發(fā)布時間：2015/10/16 10:38:57

上海恒遠生物科技有限公司主要經(jīng)營 elisa試劑盒 、生物試劑、血清、抗體、培養(yǎng)基等科研產(chǎn)品。產(chǎn)品種類齊全，暢銷國內(nèi)大部分地區(qū) ，銷售額逐年穩(wěn)步提高。我司擁有雄厚的實力、合理的價格和優(yōu)良的服務，能夠及時解決和滿足客戶的各方面的需求。ELISA試劑盒是我司的主打產(chǎn)品，在ELISA實驗中，每個步驟都需認真對待，才能使實驗準確無誤！下面讓我們一起了解ELISA試劑盒實驗過程之顯色！
顯色是ELISA中的*后一步溫育反應，此時酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)物。反應的溫度和時間仍是影響顯色的因素。在一定時間內(nèi)，陰性孔可保持無色，而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強。適當提高溫度有助于加速顯色進行。在定量測定中，加入底物后的反應溫度和時間應按規(guī)定力求準確。定性測定的顯色可在室溫進行，時間一般不需要嚴格控制，有時可根據(jù)陽性對照孔和陰性對照孔的顯色情況適當縮短或延長反應時間，及時判斷。
OPD底物顯色一般在室外溫或37℃反應20-30分鐘后即不再加深，再延長反應時間，可使本底值增高。OPD底物液受光照會自行變色，顯色反應應避光進行，顯色反應結束時加入終止液終止反應。OPD產(chǎn)物用酸終止后，顯色由橙黃色轉向棕黃色。
TMB受光照的影響不大，可在室溫中置于操作臺上，邊反應觀察結果。但為保證實驗結果的穩(wěn)定性，宜在規(guī)定的適當時間閱讀結果。TMB經(jīng)HRP作用后，約40分鐘顯色達頂峰，隨即逐漸減弱，至2小時后即可完全消退至無色。TMB的終止液有多種，疊氮鈉和SDS等酶抑制劑均可使反應終止。這類終止劑尚能使藍色維持較長時間（12-24小時）不褪，是目視判斷的良好終止劑。此外，各類酸性終止液則會使藍色轉變成黃色，此時可用特定的波長（450nm）測讀吸光值。

原創(chuàng)作者：上海恒遠生物技術發(fā)展有限公司