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點(diǎn)擊次數(shù)：15481 發(fā)布時(shí)間：2013/6/17 10:00:27
1、慢病毒轉(zhuǎn)染前18-24小時(shí)，將貼壁細(xì)胞以1×10^5/孔鋪到24孔板中。使細(xì)胞在慢病毒轉(zhuǎn)染時(shí)的數(shù)量為2×10^5/孔左右。
2、第二天，用含有6 μg/ml polybrene的2ml新鮮培養(yǎng)基替換原培養(yǎng)基，加入適量病毒懸液。37℃孵育。
3、（對(duì)polybrene毒性敏感的細(xì)胞選作此步驟）4小時(shí)后加入2ml新鮮培養(yǎng)基以稀釋polybrene。
4、繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)，用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基。
5、繼續(xù)培養(yǎng)。如果慢病毒含有熒光蛋白，一般轉(zhuǎn)染48小時(shí)后可見(jiàn)明顯熒光表達(dá)，72小時(shí)后更加明顯。如需FACS檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率，可在轉(zhuǎn)染后72-96小時(shí)進(jìn)行。如果慢病毒含有抗性基因并且需要加藥篩選，可以在轉(zhuǎn)染3-4天后開(kāi)始加藥。
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