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技術(shù)文章

猴白介素4（IL-4）ELISA試劑盒說明書

點擊次數(shù)：15302   發(fā)布時間：2013/5/29 10:42:17

猴白介素4（IL-4）操作步驟：
1. 加入50ul標準品（Standards）、血清標本于相應(yīng)反應(yīng)板孔中。
2. 每孔加入100ul酶聯(lián)物（Conjugate），輕輕混勻30秒（重要），室溫60分鐘。
3. 洗板：甩盡板內(nèi)液體，用蒸餾水或者洗滌液（普通洗滌液，自配）洗滌反應(yīng)板，并去除
水滴（在厚疊吸水紙上拍干）；這樣反復(fù)洗滌5次。
4. 每孔加入100ul顯色液， 輕輕混勻10秒，室溫20分鐘。
5. 每孔加入50ul終止液（Stop Solution）。輕輕混勻30秒；30分鐘內(nèi)在450nm處讀OD
值。elisa試劑盒

樣本處理及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. , 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐３?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
1．   試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．   濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
3．   各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4．   請每次測定的同時做標準曲線，做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請*后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5．   封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．   底物請避光保存。
7．   嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．   所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．   本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

原創(chuàng)作者：上海恒遠生物技術(shù)發(fā)展有限公司

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