服務熱線：
13636351217
13636351217
聯(lián)系人：錢經(jīng)理
電 話：13636351217
手 機：13636351217，13636351073
地 址：上海市松江臨港科技城漢橋文化科技園B座
郵 編：201615
傳 真：021-64881400
郵 箱：2881726255@qq.com
阿儀網(wǎng)商鋪：http://www.app17.com/c60514/
手機網(wǎng)站：m.shhyswkj.com
點擊次數(shù)：15239 發(fā)布時間：2013/4/8 11:57:20
蛋白質(zhì)組學即定量研究蛋白質(zhì)表達水平的變化，其在生命科學各領域的應用極為廣泛。進行雙向凝膠蛋白電泳或蛋白質(zhì)譜分析的基礎就是確保獲得高質(zhì)量的總蛋白提取物。本專題就這個問題，列舉一種常用、可信的植物總蛋白提取方法。
（一） 初步處理（大概需要8 h）
1. 樣品處理
選取無菌培養(yǎng)下的植物組織、懸浮培養(yǎng)的植物細胞，滅菌濾紙吸取多余水分。精確稱重2 g用于以下的操作。
2. 液氮冷凍研磨
將精確稱量的細胞材料置于中號研缽中，淋入少量液氮（淹沒細胞材料為宜）。待液氮揮發(fā)后，迅速研磨。若出現(xiàn)細胞材料變濕跡象，則再次淋入少量液氮進行冷凍。如此反復2~3次，即可獲得呈干燥粉末狀態(tài)的細胞材料。
3. 用50%三（TCA）和等體積2%交聯(lián)聚維酮（PVPP）混合攪拌使之與細胞粉充分接觸， 置于冰上 1 h。
（以下操作均在4℃條件下進行）
4． 15300 g 離心30 min，棄去上清液，留下沉淀。
5．清洗沉淀（大約需要4 h）
（1） 加入50% TCA，搖勻，15300 g 離心30 min，棄上清液。該操作進行一次。
（2） 加入24% TCA，搖勻，15300 g 離心20 min，棄上清液。該操作進行兩次。
（3） 加入10% TCA，搖勻，15300 g 離心20 min，棄上清液。該操作進行一次。
（4） 加入乙酸乙酯:乙醇（1:2），搖勻，15300 g 離心20 min，棄上清液。該操作進行兩次。
（5） 用80%丙酮，搖勻，15300 g 離心30 min，棄上清液。該操作進行一次。
（6） 4℃干燥沉淀。
6．加3倍量石英砂，細研。
7．用預冷的50%TCA沖洗，然后再用預冷的丙酮沖洗兩次，4℃干燥。
1. 丙酮，乙酸乙酯，乙醇，純水，EDTA鈉鹽，三（TCA），交聯(lián)聚維酮（PVPP），三氟乙烯（TFE），脫氧膽酸鈉DOCX，碳酸氫銨，二硫蘇糖醇（DTT）
2. 4-（2-aminoethyl） benzenesulfonyl fluoride; E-64, 肽酶抑制劑bestatin, 亮抑肽酶leupeptin, 抑肽酶
原創(chuàng)作者：上海恒遠生物技術發(fā)展有限公司
首 頁| 公司介紹| 產(chǎn)品展示| 公司新聞| 技術文章| 聯(lián)系我們| 客戶留言
阿儀網(wǎng) 設計制作，未經(jīng)允許翻錄必究. 聯(lián)系人：錢經(jīng)理 聯(lián)系電話：13636351217 ICP備案號：滬ICP備11004148號-11
總訪問量：8844227 管理登錄
主營產(chǎn)品：ELISA試劑盒、人ELISA試劑盒、大鼠ELISA試劑盒、小鼠ELISA試劑盒、生物試劑、抗體、血清、進口標準品、微生物培養(yǎng)基
掃一掃，關注我們！
